Facial nerve identification with fluorescent dye in rats

PURPOSE The parotidectomy technique still has an elevated paresis and paralysis index, lowering patient life's quality. The correct identification of the facial nerve can prevent nerve damage. Fluorescent dye identifies nerves in experimental studies but only few articles focused its use on facial nerve study in parotidectomies. We aimed to stain the rat facial nerve with fluorescent dye to facilitate visualization and dissection in order to prevent injuries. METHODS Forty adult male Wistar rats were submitted to facial injection of saline solution (Gsf-control group, 10) or fluorescent dye solution (Gdye group, 30) followed by parotidectomy preserving the facial nerve, measuring the time for localization and facility of localization (LocTime and LFN). Nerve function was assessed using the Vibrissae Movements (PMV) and Eyelid Closure Motion (PFP) scores. RESULTS Nerve localization was faster in Gdye group, with 83% Easy LFN rate. The Gdye group presented with low nerve injury degree and better PMV and PFP scores, with high sensitivity and accuracy. CONCLUSIONS This experimental method of facial nerve fluorescence was effective for intraoperative nerve visualization, identification and preservation. The technique may be used in future facial nerve studies, translated to humans, contributing to the optimization of parotid surgery in the near future.

Chemical and cytological analysis of cerebral spinal fluid after intrathecal injection of hypodense fluorescein / Análise química e citológica do líquor após injeção intratecal de solução hipodensa de fluoresceína

ABSTRACT INTRODUCTION: Intrathecal fluorescein has been effective for topographic diagnosis of rhinoliquorrhea. Nonetheless, there are no reports on the study of cerebral spinal fluid (CSF) after use of intrathecal fluorescein. OBJECTIVE: A prospective study attempting to evaluate CSF through chemical and cytological analysis, after injection of fluorescein. METHODS: Prospective analysis of 24 samples of CSF after intrathecal injection of fluorescein for topographic diagnosis of CSF fistulae, collected at the time of puncture and after 24 and 48 h, divided by cellularity: Group 1, up to five cells, and Group 2, with more than five cells. RESULTS: The yellow-greenish color of CSF remained after 48 h in 36%, evidencing permanence of fluorescein. No changes in protein and glucose levels were observed between 0-24 h and 0-48 h. In group 2, an increase in cell count was observed between 24 h and 48 h (p = 0.019). In both groups, there was an increase of neutrophils between 0 and 48 h (p = 0.048) and a decrease between 24 and 48 h (p = 0.05). CONCLUSION: Intrathecal fluorescein provoked discreet meningeal reactions, such as an increase of cells between 24 and 48 h and an increase of neutrophils at 24 h, with a subsequent decrease at 48 h with no correlation with symptomatology.

RESUMO Introdução: A fluoresceína intratecal tem sido efetiva no diagnóstico topográfico da rinoliquorréia. Entretanto, não há estudos no líquor após o uso de fluoresceína intratecal. Objetivo: Estudo prospectivo visando avaliar o líquor, através de análise química e citológica, após injeção de fluoresceína. Método: Análise prospectiva de 24 punções após injeção intratecal de fluoresceína para diagnóstico topográfico de fístula liquórica, coletado no momento da punção, 24 e 48 horas, divididos pela celularidade: grupo 1, com até 5 células e grupo 2 com mais de 5 células. Resultado: A coloração amarelo-esverdeada do líquor permaneceu após 48 horas em 36%, evidenciando permanência de fluoresceína. Observou-se ausência de mudanças no nível de proteína e glicose entre 0-24 horas e 0-48 horas. No grupo 2, um aumento na contagem celular foi observado entre 24 e 48 horas (p = 0,019). No dois grupos juntos, observou-se um aumento de neutrófilos entre 0 e 48 horas (p = 0,048) e uma diminuição entre 24 e 28 horas (p = 0,05). Conclusão: Fluoresceína intratecal provocou discretas reações meníngeas, como o aumento de células entre 24 e 48 horas e aumento dos dos neutrófilos em 24 horas com uma subsequente dimi nuição em 48 horas sem correlação com sintomas.

Análise quantitativa e qualitativa do filme lacrimal nos pacientes submetidos a PRK e LASIK com femtossegundo / Analysis quantitative and qualitative of the tear film in patients undergoing PRK and LASIK with femtosecond

Objetivo: Analisar a secreção lacrimal, coloração da superfície ocular e estabilidade do filme lacrimal em indivíduos submetidos à cirurgia de PRK e LASIK com laser de femtossegundo (femto LASIK). Métodos: Vinte olhos de 10 pacientes submetidos à técnica de Femto LASIK e 11 olhos de 6 pacientes submetidos à técnica de PRK foram estudados de forma prospectiva, longitudinal e intervencionista. Tempo de rotura do filme lacrimal (TRFL), teste de Schirmer basal e coloração da superfície ocular com lissamina verde foram analisados no pré-operatório (pré), no 15º e no 30º dia pós-operatório (15º pós e 30º pós, respectivamente). Resultados: Agrupando todos os olhos, observou-se que o TRFL reduziu-se de forma estatisticamente significante no 15º pós em relação ao valor pré-operatório (p=0,025), mantendo-se reduzido no 30º pós (p= 0,001); não houve diferença estatisticamente significativa entre o 15º pós e o 30º pós (p=0,219). No teste da lissamina verde, houve aumento significativo desse escore, no 15º pós em relação ao período pré-operatório (p=0,021), havendo, posteriormente, redução no 30º pós (p=0,010). No teste de Schirmer basal, não foi detectada mudança estatisticamente significante ao longo dos três momentos (p=0,107). Comparando-se os testes TRFL, lissamina verde ou Schirmer basal, nos dois grupos estudados (PRK e LASIK), não houve diferença estatisticamente significante em nenhum dos três momentos (pré, 15º pós e 30º pós). Conclusão: Evidenciou-se alteração do filme lacrimal nos pacientes submetidos à cirurgia refrativa, quando foram utilizados os testes de TRFL e lissamina verde. Nas duas técnicas empregadas, não houve diferença estatisticamente significante de alteração do filme lacrimal, quando comparadas entre si (PRK e LASIK). .

Purpose: To evaluate tear film stability, ocular surface staining and tear secretion in patients undergoing PRK and femtosecond laser LASIK. Methods: Twenty eyes of 10 patients submitted to femtosecond laser LASIK and 11 eyes of the 6 patients submitted do PRK underwent tear film break-up time (TBUT), Schirmer’s basal and lissamine green staining measurements pre and postoperatively on days 15 (PO 15) and 30 (PO 30). Results: When grouping all eyes TBUT was reduced on PO 15 (p=0.025) and on PO 30 (p=0.001) compared to preoperative values. No difference was found between PO 15 and PO 30 (p=0.219). Compared to preoperative measurements, lissamine green test demonstrated a significant increase in score on PO 15 (p=0.021) and a significant reduction on PO 30 (p=0.010), when both groups were analyzed together (all 42 eyes). No changes in Schirmer’s basal test were detected in all 3 time periods (p=0.107). TBUT, lissamine green and Schirmer’s basal measurements were no different in all 3 time periods when both groups (PRK and femtosecond laser LASIK) were compared. Conclusion: TBUT and lissamine green measurements were altered after refractive surgery regardless the technique (PRK or femtosecond laser LASIK). When comparing one technique to the other, no difference was found in all measurements. .

Administração do gene da proteína verde fluorescente no músculo tireoaritenóideo do rato pela técnica de eletroporação / Administration of the green fluorescent protein gene into the rat thyroarytenoid muscle using the electroporation technique

A eletroporação é uma técnica de administração de pulsos elétricos no tecido que promove a entrada de genes na célula. Utilizou-se o gene do marcador da proteína fluorescente verde, o qual foi injetado no músculo tireoaritenóideo previamente à aplicação dos pulsos. Foram estudadas 32 laringes de ratos, divididas em grupos de alta voltagem, baixa voltagem e associação de alta e baixa voltagem. Cortes histológicos foram analisados e os grupos comparados quanto a número, intensidade da fluorescência, distribuição das fibras musculares marcadas e infiltrado inflamatório. O grupo de alta e baixa voltagens foi o mais eficiente, de acordo com os parâmetros estudados.Electroporation is a technique for the application of electric pulses in a tissue that allows the entrance of genes into a cell. The gene Enhanced green fluorescent protein was injected into the thyroarythenoid muscle before the pulse application. Thirty- two rat larynges were divided into groups of high voltage, low voltage and high and low voltage together. Histological sections were analized and the groups were compared in relation to the number, fluorescent signal, distribution of the marked muscular fibers and the inflammatory pattern. The group of high and low voltage pulses had the best performance according to these parameters...

The projection of GABAergic neurons of the medial terminal accessory optic nucleus to the pretectum in the rat

Large numbers of neurons were retrogradely labeled in both the dorsal and ventral medial terminal nucleous (MTN) after fluoro-gold injections into the rat pretectal nucleus of the optic tract/dorsal terminal nucleus (NOT/DTN). Fluorescence immunocytochemistry for GABA in the same brains revealed GABA-positive neurons distributed mainly in the dorsal MTN. Approximately half of all the GABAergic neurons in the MTN were double-labeled. Therefore, GABAergic neurons comprise a significant component of the MTN-NOT-DTN projection which most likely inhibits the pretectal pathway mediating horizontal optokinetic nystagmus